Py-BODIPY-NHS ester

BODIPY染料是一种具有强紫外吸收能力、明亮的红色荧光染料，具有高消光系数和荧光量子产率，对溶剂极性和pH值变化相对不敏感，在不同生理条件下相对稳定。其具有独特的疏水特性，可以很好的穿过细胞膜进入细胞内部，适用于染色脂质、膜和其他亲脂性化合物，可用于标记活细胞和固定细胞。BODIPY染料具有相对较长的激发状态寿命，可用于基于荧光偏振的测定以及多光子激发的大型双光子横截面。

由于其结构的非对称性，BODIPY具有多种衍生结构产物。Py-BODIPY-NHS ester是将BODIPY染料与蛋白或抗体偶联的常用工具。NHS酯可用于标记蛋白的伯胺（R-NH2）、胺修饰的寡核苷酸和其他含胺分子。由此产生的BODIPY-NHS偶联物具有明亮荧光、窄发射带宽和相对较长的激发状态寿命等特点。该反应性染料在荧光基团与NHS酯基团之间存在一个C3烷基间隔。该间隔有助于将荧光基团与连接点分离，可能减少荧光基团和其偶联的生物分子的相互作用。

体外实验：

溶解性(25°C)：溶于DMSO（5mg/ml）

*请参考溶解度信息来选择合适的溶剂配制储备液。配成溶液后，请分装保存，避免反复冻融。

*储备液的保存条件：-80℃，保存6个月；-20℃，保存1个月（密封，避湿避光）。

*Purescix内部测试了所有化合物的溶解度，若实际溶解度与公布的值略有不同为正常现象，是由于批次之间的轻微差异造成的，请适当调整之后使用。

体内实验(现用现配)：

10% DMSO→ 40% PEG300→ 5% Tween-80→ 45% Saline

此方案可获得 ≥ 500 μg/mL的澄清溶液

以1mL工作液为例，取100μL 5mg/ml的澄清DMSO储备液加到400μL PEG300中，混合均匀使其澄清；向上述体系中加入50μL Tween-80，混合均匀使其澄清；然后继续加入450μL生理盐水定容至1mL。

*以上溶解方案仅供参考，您根据实验动物和给药方式进行适当的调整。

*体内实验的工作液，建议现用现配，当天使用。

*如果在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过加热和/或超声的方式助溶。

体外—细胞标记：

1. Py-BODIPY NHS ester储存液的配制

本品是以粉末形式提供，使用前需将本品回温至室温，用细胞培养级别的无水DMSO将其充分溶解。请根据产品使用目的选择合适的溶剂及浓度配制储备液。

【注】一旦配成溶液，可根据单次的使用量将储存液分装后放到-20℃避光，避免反复冻融造成产品失效。

2. Py-BODIPY NHS ester工作液的配制

用预热好的无血清细胞培养基或PBS稀释储存液至工作液浓度。一般推荐使用浓度为1-10 μM。为了避免染色过度导致的背景荧光过强，在不影响实验结果的前提下应尽可能地选择低浓度染色。

【注】请根据实际情况调整 Py-BODIPY NHS ester工作液浓度，且现用现配。

3. 细胞染色及检测

（1）悬浮细胞

① 离心收集约1×106个细胞，加入PBS洗涤两次，每次5 min。

② 加入1 mL Py-BODIPY NHS ester 工作液，与细胞混匀，室温孵育5-30 min。

③ 400 g，离心 3-4 min，弃去上清。

④ 加入PBS洗涤细胞两次，每次5 min。

⑤ 用1 mL无血清培养基或PBS重悬细胞。被染色的细胞可用流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光显微镜进行分析。

（2）贴壁细胞

① 培养皿/板内加入适量的培养基覆盖盖玻片进行爬片培养。

② 当细胞长至所需丰度，从培养基中移出盖玻片，吸除多余培养基，用PBS洗涤两次。

【注】贴壁细胞也可不使用爬片，直接在孔板中培养、处理、标记细胞。

③ 加入适量Py-BODIPY NHS ester染料工作液，轻轻晃动使完全覆盖，孵育15-45 min（最佳孵育时间需优化）。

④ 吸去染料工作液，用无血清培养基洗2-3 次，随后置于荧光显微镜下观察或荧光酶标仪下读数。或消化细胞后进行流式检测。

1. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2. 我司产品为非无菌包装，若用于细胞培养，请提前做预处理（如0.22μm滤膜过滤），除去热原细菌，否则会导致染菌。

3. 溶解性是在室温下测定的，如果温度过低，可能会影响其溶解性。

4. 科研试剂，严禁用于人体和临床。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6. 部分产品我司仅能提供部分信息，我司不保证所提供信息的权威性，以上数据仅供参考交流研究之用。

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