TNBS, 1M in H2O(结肠炎诱导剂）

体外实验：溶解性(25°C)：与水任意比例混合稀释

*请参考溶解度信息来选择合适的溶剂配制储备液。配成溶液后，请分装保存，避免反复冻融。

*Purescix内部测试了所有化合物的溶解度，若实际溶解度与公布的值略有不同为正常现象，是由于批次之间的轻微差异造成的，请适当调整之后使用。

体内实验(现用现配)：与生理盐水或PBS任意比例混合稀释

*以上溶解方案请先按照上述体外实验溶解数据配制澄清的储备液，再依次添加助溶剂。

*以上溶剂前显示的百分比是指该溶剂在终溶液中的体积占比。

*以上溶解方案仅供参考，您根据实验动物和给药方式进行适当的调整。

*体内实验的工作液，建议现用现配，当天使用。

*如果在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过加热和/或超声的方式助溶。

产品描述：TNBS是一种半抗原，能够与组织蛋白结合并转变为抗原，从而引发多种免疫反应。TNBS诱导的结肠炎是一种对半抗原化蛋白的迟发性超敏反应。在这种TNBS诱导的结肠炎中，主要的炎症介质包括白三烯B4（LTB4）和单羟基脂肪酸，如5-羟基二十碳四烯酸（5-HETE）、12-HETE和15-HETE。本品为TNBS 的水溶液，专门用做IBD动物造模,浓度为1M。每只含TNBS为0.293克。

体外研究(In Vitro)：【来源于公开文献，仅供参考】

TNBS可诱导Caco-2细胞凋亡[1]。

体内研究(In Vivo)：【来源于公开文献，仅供参考】

TNBS诱导结肠炎[2][3][4]

1. 原理：乙醇破坏肠黏膜屏障，TNBS作为一种有机酸半抗原渗入结肠组织，与组织蛋白等高分子物质结合，形成全抗原，使T淋巴细胞致敏，溶解了与半抗原结合的动物自身细胞，引起肠壁一系列免疫应答和炎症反应，随着组织的逐渐修复，可出现一系列肠壁的增生性改变。

2. 具体造模方法：

（1）2% TNBS溶液配制：取0.35mL TNBS, 1M in H2O+2mL无水乙醇+2.65mL生理盐水，混匀备用。

（2）大鼠随机分组，禁食24小时，自由饮水。

（3）禁食结束后，称重并将大鼠麻醉。

（4）使用一次性直肠给药导管导入大鼠距肛门约8cm的结肠内，缓慢注入2%TNBS溶液，给药剂量为100mg/kg。

（5）给药后将大鼠保持垂直倒立至少1min，保证TNBS溶液不外溢。

（6）造模后大鼠平躺，自然清醒，常规饲养。每天观察大鼠的粪便性状、进食情况和精神状态。

注：A. 禁食时间：禁食24h，麻醉给药前用棉签刺激肛门，促进排除末端肠道内粪便。

B. 动物麻醉深度：需要深麻醉，即动物对疼痛刺激无反应才好。

C. 药物浓度：高浓度药物对肠道的刺激更重，容易引起药物外溢。因此采用无水乙醇与生理盐水结肠灌注，就极少有外溢现

象。即结肠给药的TNBS溶液中主要包括三个成分：TNBS，乙醇和生理盐水。

D. 给药速度：给药时要匀速缓慢给药，避免引起肠道反射。

E. 给药体积：大鼠 0.5~1.2mL，小鼠应该 0.05~0.2mL左右。

F. 灌肠后保持肛门高位1~5min，防止药物流出。

3. 造模成功指标

临床症状：体重减轻；DAI (疾病活跃指数评分) 升高；组织水肿充血，有炎症现象。(DAI主要从三个方面进行评估打分，分别为体重、粪便粘稠度、粪便潜血等)

结肠变化：结肠长度缩短，结肠组织切片中炎症细胞浸润明显增加，甚至溃疡形成。

细胞层面变化：杯状细胞脱落，上皮细胞和杯状细胞消失，腺隐窝开口扩张、隐窝脓肿，肌肉层增厚和脱离。

1. 溶解性是在室温下测定的，如果温度过低，可能会影响其溶解性。

2. 科研试剂，严禁用于人体和临床。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4. 部分产品我司仅能提供部分信息，我司不保证所提供信息的权威性，以上数据仅供参考交流研究之用。

[1]. Yue Lu, et al. Sijunzi Decoction attenuates 2, 4, 6-trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS)-induced colitis in rats and ameliorates TNBS-induced claudin-2 damage via NF-κB pathway in Caco2 cells. BMC Complement Altern Med. 2017 Jan 10;17(1):35.

[2]. Jan Seibel, et al. Oral treatment with genistein reduces the expression of molecular and biochemical markers of inflammation in a rat model of chronic TNBS-induced colitis. Eur J Nutr. 2009 Jun;48(4):213-20.

[3]. Nikoletta Almási, et al. Lessons on the Sigma-1 Receptor in TNBS-Induced Rat Colitis: Modulation of the UCHL-1, IL-6 Pathway. Int J Mol Sci. 2020 Jun 5;21(11):4046.

[4]. Laura Peran, et al. Lactobacillus fermentum, a probiotic capable to release glutathione, prevents colonic inflammation in the TNBS model of rat colitis. Int J Colorectal Dis. 2006 Dec;21(8):737-46.

[5]. Laura Peran, et al. Preventative effects of a probiotic, Lactobacillus salivarius ssp. salivarius, in the TNBS model of rat colitis. World J Gastroenterol. 2005 Sep 7;11(33):5185-92.

[6]. Nobuki Ichikawa, et al. Novel anti-inflammatory agent 3-[(dodecylthiocarbonyl)-methyl]-glutarimide ameliorates murine models of inflammatory bowel disease. Inflamm Res. 2016 Mar;65(3):245-60.

[7]. Zili Zhang, et al.Critical role of IL-17 receptor signaling in acute TNBS-induced colitis. Inflamm Bowel Dis. 2006 May;12(5):382-8.

[8]. Lu Liang, et al. Human umbilical cord mesenchymal stem cells ameliorate mice trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS)-induced colitis. Cell Transplant. 2011;20(9):1395-408.  

[9]. T Ten Hove, et al. Blockade of endogenous IL-18 ameliorates TNBS-induced colitis by decreasing local TNF-alpha production in mice. Gastroenterology. 2001 Dec;121(6):1372-9.

[10]. Hideyuki Tozaki, et al. Chitosan capsules for colon-specific drug delivery: enhanced localization of 5-aminosalicylic acid in the large intestine accelerates healing of TNBS-induced colitis in rats. J Control Release. 2002 Jul 18;82(1):51-61.